Aislamiento, purificación, identificación y evaluación de la actividad antimicrobiana de un compuesto de Aplysina gerardogreeni, Gómez y Bakus, 1992 (Porífera; Demospongia).

Abstract

Las esponjas marinas del orden Verongida (Phylum Porifera; Clase Demospongia) son un recurso potencial de gran interés biológico y químico, debido a la presencia de metabolitos secundarios derivados de la bromotirosina y clorotirosina que presentan actividad in vitro e in vivo contra bacterias Gram positivas y Gram negativas. Considerando la importancia de buscar nuevas biomoléculas con actividad bacteriostática y bactericida para contrarrestar microorganismos patógenos resistentes, se estudio a Aplysina gerardogreeni con la finalidad de aislar, purificar e identificar algún compuesto con actividad antimicrobiana, la esponja fue colectada en el Islote la Ballena, de la Isla Espíritu Santo B.C.S., mediante buceo SCUBA con la autorización de SEMARNAT (oficio no. DOO.02.7488 del 7 de diciembre del 2000) después de obtener el extracto hexánico por el método de maceración exhaustiva con Hex 100%, se llevo a cabo de la misma manera la preparación del extracto de CH2 CI2 con CH2 CI2 100% obteniéndose 131g de extracto crudo (7.27%) del peso seco de la esponja) que fueron tratados con metanol 100%, obteniéndose una fase soluble y una insoluble. La fase soluble en metanol (RED001 CH2 CI2 M) del extracto de CH2 CI2 de A. gerardogreeni fue fraccionada mediante cromatografía en capa fina (TLC) y columna (CC). Se obtuvieron 75 mg de un compuesto con punto de fusión igual a 146°C. La caracterización química de este compuesto se llevo a cabo por medio de espectrofotometría de infrarrojo, por comparación con un estándar del acido (2-hidroxi-3,5-dibromo-4-metoxifenil) acético. Se determino la concentración mínima inhibitoria contra staphylococcus aureus (resistente a penicilina, ampicilina y acido nalidíxico), Bacillus subtilis, Streptococcus feacalis, Escherichia coli ATCC 25922, Vibrio harveyi ATCC35804 y Candida albicans, por el método de dilución en caldo mediante la utilización de microplaca. Microplacas con 96 celdas fueron preparadas, conteniendo 200 uL/celda de medio con 7.5x10 6 CFU /celdas del microorganismo de prueba. Se adicionaron 50 uL/celda de la muestra. La inhibición del crecimiento fue determinada después de 24 h de exposición a un gradiente de concentración de 500 a 15.62 ug / mL a 37°C; se midió el cambio en la densidad óptica (640 nm), con un lector de microplacas BIO-RAD 550. Los microorganismos de prueba fueron cultivados el Caldo Mueller Hinton e incubados por 24 h a 37°C, a excepcion de C. albicans que fue cultivada en Caldo Dextrosa Sabouraud y V. harveyi ATCC 35084 en Caldo Tripticaseina Soya con sal al 2.5% respectivamente como medios de cultivo. Los ensayos y lecturas fueron realizados por triplicado. Azitromicina fue utilizada como control positivo de inhibición y acetona y agua como controles negativos. El ácido (2-hidroxi-3,5-dibromo-4-metoxifenil) acético inhibió el desarrollo de S. aureus a 250 ug/mL, B.subtilis a 250 ug/mL, S. faecalis a 62.5 ug/mL y V. harveyii a 500 ug/mL Candida albicans y Escherchia coli ATCC 25922, no mostraron inhibición a 500 ug/mL.