DAÑO OCASIONADO POR BOMBARDEO DE PARTÍCULAS EN CULTIVOS CELULARES DE CEMPAXÚCHIL (Tagetes erecta L.)

Abstract

El cempaxúchil (Tagetes erecta L.) es una planta ornamental que acumula carotenoides en inflorescencias de color amarillo o naranja, aunque también existen variedades blancas. Estos metabolitos tienen propiedades nutracéuticas y se utilizan para la prevención de algunas enfermedades. En esta investigación se evaluaron los daños causados en la pared y membrana celular por el bombardeo de partículas de oro en células desdiferenciadas de T. erecta L. de la variedad French Vanilla (FV). La caracterización de la cinética de crecimiento de callos se realizó utilizando peso seco (PS) diariamente durante 14 días. Se seleccionaron los puntos en la cinética de crecimiento celular (0, 4, 6, 11, 13 y 14 días) con el fin de bombardear micropartículas de oro con el plásmido pBI426, mediante la técnica de biobalística, a una distancia de 11.5 cm y una presión de 60 psi evaluando la expresión transitoria del gen uidA. Por otro lado, el uso de dos fluorocromos diferentes: diacetato de fluoresceína (DAF) y yoduro de propidio (PI) permitieron cuantificar la viabilidad de los callos bombardeados. Con el DAF se detectaron células vivas y con IP se identificaron células muertas. Finalmente, se evaluaron los cambios en la morfología de las células de callos bombardeados de cuatro tratamientos, bombardeados con medio osmótico (B/OS), bombardeados sin medio osmótico (B/sinOS), sin bombardear con medio osmótico (sinB/OS), y sin bombardear sin medio osmótico (sinB/sinOS). Las imágenes obtenidas se procesaron mediante tratamiento digital de imágenes (TDI), se observó plasmólisis en células bombardeadas, tratados previamente con medio osmótico de 0.2 M D-manitol. Los resultados mostraron que el día 4, en el tratamiento B/OS, es el mejor momento para bombardear ya que la expresión del gen uidA presentó un promedio de 44.6 foci y una viabilidad de 49.7%, por encima de los dos tratamientos restantes B/sinOS y sinB/OS, que no mostraron la expresión del gen uidA. En el análisis de imágenes de los tratamientos B/OS, B/sinOS, sinB/OS y sinB/SinOS, se pudieron observar cambios en los parámetros morfométricos como área, perímetro, circularidad y longitud máxima; en el área se observó un aumento después del 4 día y en cuanto a la circularidad, los callos presentaron una pérdida de su morfología esférica a través del tiempo, recuperándose después de 14 días, sugiriendo cambios morfoestructurales evidentes, en los cuales los valores de circularidad, van de 0.71 a un valor más irregular o alargado de 0.65 en paredcelular y, valores alrededor de 0.53 en la membrana celular en los tratamientos con medio osmótico lo que indica que está ocurriendo un cambio por efecto del tratamiento.