Estudio de la actividad frente a bacterias patógenas de cinco especies algales: pros y contras del protocolo de aislamiento guiado por bioensayo

Abstract

El trabajo se dividió en dos partes. En la primera se enfocó al estudio de cuatro especies de algas del género Gracilaria por su actividad antimicrobiana sobre bacterias del género Vibrio de importancia patogénica en organismos de cultivo. Los extractos etanólicos de G. veleroae, G. vermiculophylla, G. subsecundata y G. marcialana mostraron actividad inhibitoria contra Vibrio alginolyticus, V. campbellii, V. harveyi y V. parahaemolyticus. El perfil cromatográfico determinado por cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) mostró similitud en la composición química de las cuatro especies, por lo que se planteó la hipótesis de que las cuatro especies algales podrían estar sintetizando un mismo principio activo. La especie que mostró mayor actividad en las pruebas antibacterianas frente a todas las cepas fue G. vermiculophylla, por lo que esa especie fue seleccionada para continuar el estudio utilizando el protocolo de aislamiento guiado por bioensayo en búsqueda del compuesto activo. Después de varios pasos de fraccionamiento y ensayo antimicrobiano se encontró que los disolventes utilizados (hexano y acetato de etilo) contenían impurezas que mostraron actividad contra las mismas bacterias que los extractos algales. Esto trajo como consecuencia la imposibilidad de utilizar la información generada, ya que era difícil saber si la actividad observada en las pruebas antibacterianas era debida a los extractos o a las impurezas. La hipótesis de prueba fue desechada, ya que la suposición sobre la cual fue construida era una interpretación inadecuada del fenómeno. Con el fin de probar el protocolo, se planteó el estudio del extracto etanólico del alga café Macrocystis pyrifera, el cual había demostrado actividad inhibitoria frente a Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes en estudios previos. Se estudió el extracto activo utilizando el protocolo de fraccionamiento guiado por bioensayo; se logró aislar y purificar una mezcla de esteroles, de los cuales uno de ellos fue identificado espectroscópicamente como colesterol, mientras que el segundo esterol de la mezcla continúa en estudio y probablemente se trate de fucosterol. A pesar de que un número de fracciones fueron activas al menos contra S. aureus y S. pyogenes en estudios previos, no hubo oportunidad de probar la actividad de los compuestos esteroidales aislados debido a la poca cantidad obtenida. Se discuten los pros y contras del protocolo de aislamiento guiado por bioensayo, el cual tiene el potencial de conducción al descubrimiento de nuevos compuestos biológicamente activos, aunque también se pueden obtener resultados no esperados, tal como la contaminación de extractos, fracciones o compuestos por impurezas del disolvente o materiales utilizados. Las impurezas típicamente no suelen mostrar actividad biológica, sin embargo en el caso de G. vermiculophylla, desafortunadamente, no es posible determinar la responsabilidad de manera absoluta de la actividad contra Vibrio alginolyticus, V. campbellii, V. harveyi y V. parahaemolyticus. Otro de los aspectos que constituyen una desventaja del protocolo es que también puede conducirnos al aislamiento de sustancias conocidas, tal como ocurrió con el aislamiento de colesterol a partir de M. pyrifera.