ANÁLISIS DEL CONTENIDO DE TAXANOS Y SU RELACIÓN CON LA EXPRESIÓN DEL GEN ts EN CULTIVOS in vitro DE Taxus globosa Schltdl.

Abstract

El árbol de Taxus globosa Schltdl se encuentra bajo protección especial debido a que está en peligro de desaparecer por lo que se hace necesario un sistema iotecnológico sustentable con la finalidad de tener una alternativa viable para la conservación de la especie. T. globosa posee un potencial biológico ya que presenta un alto contenido de taxanos con interés farmacológico, entre los más importantes se encuentra el taxol, el cual es utilizado como un potente anti cancerígeno. En este trabajo de investigación se estableció por primera vez el cultivo in vitro de T. globosa, obteniendo cultivos de callos friables de color café claro derivados de hoja en medio Gamborg (B5) de inducción (ácido naftaleno acético [ANA 2 mg/L]) a los 10 días de cultivo. Los cultivos de callo se subcultivaron en medio B5 de producción el cual contenía picloram (PIC) 4 mg/L, cinetina (CN) 1 mg/L y ácido giberélico (AG3) 0.5 mg/L, durante 33 días; estos cultivos presentaron un tiempo de duplicación de 14.5 días y una velocidad de crecimiento de 0.047 d-1. Con respecto a la produccion de taxanos los callos de T. globosa produjeron cuatro de los cinco taxanos que se análizaron. Los de mayor concentración fueron: la cefalomanina (80.82 μg/g de Peso seco y un rendimiento de 2.69 x10 – 06) y el taxol (55.88 μg/g de Peso seco y un rendimiento de 1.86 x10 - 06); por otro los que se produjeron en menor concentración fueron la baccatina III (38.06 /g de Peso seco y un rendimiento de 1.27 x10 – 06 y el 10-deacetiltaxol (8.72/g de Peso seco y un rendimiento de 2.91 x10 – 07). Los cultivos de células en suspensión se establecieron a partir de callo friable derivado de hoja en medio B5 producción, durante 32 días; los cuales fueron elicitados con jasmonato de metilo (100μM) en condiciones de obscuridad. Estos cultivos tuvieron un tiempo de duplicación de 1.2 días y una viabilidad celuar de 81.5%. Mediante la elicitacion se logró estimular e incrementar la producción de cinco taxanos presentes en la especie, de los cuales el taxol tuvo una producción total de 2574.1 μg/L al día 20 de cultivo con un porcentaje de excreción de 31.62%, el 10-deacetiltaxol tuvo una concentración de 629.7 μg/L al día 1 y 4.63% de excreción seguido de baccatina III con 302.24 μg/L al día 16 con 56.37% de excreción, la cefalomanina con 189.3 μg/L a las 6 horas de haber añadido el elicitor obteniendo 3.37% de excreción, por último la 10- deacetilbaccatina III se obtuvó a una concentración total de 120 μg/L con 96.01% de excreción al día 28 de cultivo. En estos cultivos no se logró estimular al 100% la excreción de los cinco taxanos al medio de cultivo. Con respecto a la expresión del gen ts y su relación con la producción de los taxanos, se observó que en los cultivos control la expresión del gen ts, se mantiene sin cambios notables; sin embargo, en los cultivos elicitados se observa un incremento del transcrito a las 24 y 96 horas, el transcrito se acumula hasta cinco veces con relación a lo cuantificado en el control. En base a estos resultados se tienen establecidas las condiciones de cultivo de callos y líneas celulares productoras de cinco taxanos derivados del cultivo in vitro de T. globosa y su relación con la acumulación del transcrito del gen ts en los cultivos celulares control y elicitados con jasmonato de metilo.