ESTUDIOS DE SEPARACIÓN DE LAS PROTEASAS DEL CUAGUAYOTE (Jacaratia mexicana A. DC.)

Abstract

Se realizaron estudios de aislamiento de las proteasas contenidas en el látex de cuaguayote (Jacaratia mexicana A. D.C.) ensayando, comparativamente, métodos cromatográficos de separación por exclusión de tamaños moleculares e intercambio iónico, con el método de extracción bifásica acuosa utilizando un sistema constituido por polietilén glicol y sulfato de amonio. En la fase inicial de la investigación se determinó que el látex de cuaguayote proveniente de plantas en estado silvestre mostró, comparativamente con el látex de plantas semicultivadas, una mayor actividad proteolítica sobre caseína y un patrón de especies proteínicas con una mayor diversidad de componentes, al menos ocho, con masas moleculares ampliamente distribuidas en toda la gama de movilidades relativas. Con base en estos resultados, se seleccionó el látex de cuaguayote silvestre para realizar el presente estudio. El sistema de extracción bifásica acuosa ensayado (PEG 8000 12%, sulfato de amonio 15% y látex 15%) produjo cuatro fases en las que separó, de manera más eficiente y rápida, diferentes especies con actividad proteolítica: una fase precipitado (P), de la que se obtuvo a su vez un precipitado ligero (PL) de menor densidad; y la fase sobrenadante (S), de la que se separó un sobrenadante ligero (SL). Estas preparaciones presentaron perfiles electroforéticos similares de componentes proteínicos pero con diferentes grados de purificación. Las determinaciones de actividad proteolítica (caseinolítica), amidolítica sobre el sustrato cromogénico BAPNA, y de actividad sobre gelatina analizada mediante zimografía en gel de poliacrilamida, de las proteasas contenidas en la Fase P, demostraron el aislamiento definido de tres proteasas con masas moleculares de 22, 24 y 26 kDa aproximadamente. Se interpreta que el componente de 24 kDa correspondería a la proteasa mexicaína, y que las otras dos corresponden, en principio, a nuevas especies proteolíticas que no habían sido informadas anteriormente, que requerirán de más investigación. Los resultados mostraron la utilidad y amplias perspectivas de la EBA en el aislamiento y purificación rápida, en mayores concentraciones, de las proteasas del látex de cuaguayote, facilitando con esto la potencial realización de estudios de caracterización bioquímica y estructural subsecuentes más completos.