CULTIVO in vitro DE Jatropha curcas PARA LA OBTENCIÓN DE CURCINA.

Abstract

La curcina es una proteína inactivadora de ribosomas tipo I con interés farmacéutico por su actividad antitumoral. Este metabolito ha sido aislado de forma ex vitro en semilla, hoja y tallo de Jatropha curcas L. de genotipos tóxicos y no tóxicos, mientras que en material cultivado in vitro no ha sido reportada. La propagación de J. curcas mediante cultivo de células y tejidos vegetales representa una alternativa para la obtención de esta proteína. Por lo que el objetivo de este trabajo fue establecer las condiciones in vitro para la inducción de brotes y callos, así como identificar la presencia de curcina en el material in vitro obtenido. Se estableció un sistema de desinfestación de explantes de segmentos nodales de tallo con solución jabonosa, tween 20 al 1% e hipoclorito de sodio al 1%. El cultivo in vitro se estableció en medio semisólido de Murashige y Skoog (MS) con AIB (0, 0.1, 0.25 y 0.5 mg·L-1) combinado con BAP (0, 0.1, 0.25 y 0.5mg·L-1), con lo que se obtuvo callos friables en el tratamiento AIB 0.5 mg·L-1 + BAP 0.25 mg·L-1 a los 21 días de incubación en el 100% de los explantes. La brotación se presentó en todos los tratamientos, obteniéndose plántulas completas y brotes múltiples, siendo el mejor AIB (0.1, 0.5 mg·L-1 + BAP 0.25 mg·L-1). Se evaluó la cinética de crecimiento celular del callo resultando un tiempo de duplicación celular de 6.64 días y una velocidad específica de crecimiento de 0.151 d-1. Se prepararon extractos de las muestras en búfer salino de fosfatos a pH 7.2, los cuales fueron fraccionados por cromatografía de exclusión molecular. Los perfiles de elución molecular de los extractos mostraron dos picos para los extractos de plántulas in vitro y tres picos para los de callo. De las fracciones resultantes, así como de los extractos crudos de material in vitro se cuantificó la concentración de proteína cruda por el método del ácido bicinconínico. De estas fracciones y extractos crudos se realizaron los perfiles electroforéticos para identificar bandas de 28-32 kDa las cuales podrían corresponder a la curcina.