ANÁLISIS FITOQUÍMICO DE EXTRACTOS DE HOJA Y CÉLULAS DESDIFERENCIADAS DE CIRIÁN (Crescentia alata Kunth) Y ENSAYO PRELIMINAR DE LA EXPRESIÓN DEL GEN fls.

Abstract

El objetivo de este trabajo fue analizar la composición de los extractos provenientes de hojas y células desdiferenciadas de cirián y el análisis preliminar de la expresión del gen fls que codifica para la enzima flavonol sintasa. Se germinaron in vitro semillas de cirián. Estas plántulas sirvieron como fuente de explantes para generar el cultivo de células desdiferenciadas a partir de tallo. La combinación 2,4-D [0.22 mg/L], TDZ [1.10 mg/L] y CIN [0.22 mg/L] resultó ser idónea para el establecimiento de un sistema de producción y propagación de callo friable. Se evaluaron los extractos de callo y hoja por medio de cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC). El perfil cromatográfico reveló una gran variedad de compuestos pertenecientes al grupo de los fenilpropanoides, flavonoides y terpenos en hoja, así como de iridoides y fenilpropanoides en callo. Para el análisis de expresión, se aisló ARN total de callo, hoja, tallo y raíz de plántulas cultivadas in vitro y ex vitro, obteniéndose un rendimiento de 66 a 114 μg de ARN/g de tejido congelado. Se amplifico un fragmento del gen fls que codifica para la enzima flavonol sintasa con oligonucleótidos diseñados a partir de secuencias conservadas de varias especies. Este fue utilizado como sonda para la hibridación en los análisis Southern y Northern-blot; el análisis Southern-blot indicó al menos una copia del gen dentro del genoma de cirián, mientras que el análisis Northern-blot indicó un mayor nivel de expresión del gen fls en hoja ex vitro, esto sugiere que la expresión del gen fls en cirián ocurre en tejido especializado.