PURIFICACION DE UN HERBICIDA DE Streptomyces sp cepa 1M5a

Abstract

En un trabajo previo sobre aislamiento de cepas de actinomicetos con actividad fitoreguladora, se identificó una cepa de Streptomyces (1M5a), que presentó un efecto herbicida contra semillas de jitomate (Spezzia-Mazzocco y col, 2002; Cercado-Jaramillo y col, 2004. La cepa 1M5a demostró la producción de compuestos difusibles asociados al metabolismo secundario. En el presente estudio se definió un medio de cultivo útil para el cultivo de 1M5a y la producción de metabolitos herbicidas. Utilizando un medio complejo, SB, se detectó la mayor producción de herbicidas en el 5º día de fermentación a nivel de matraz agitado. Se mejoraron los métodos de extracción para la recuperación de herbicidas a partir del sobrenadante de fermentación. Los extractos de mayor actividad se detectaron con solventes no polares, señaladamente hexano y tolueno. La mayor contribución del trabajo consiste en el desarrollo de un método de extracción más eficiente, que es posible por la utilización de mezclas de hexano-isopropanol y cloroformo metanol. A partir de liofilizados de sobrenadantes de fermentación, y mediante la separación por cromatografía de capa fina, bioautografía, protocolos de extracción en fase sólida, se generaron preparaciones purificadas con gran actividad herbicida, particularmente activas en la inhibición de germinación de semillas de jitomate (utilizado como sistema modelo de dicotiledóneas). Las preparaciones se analizaron por HPLC acoplada a detección por arreglo de diodos. Un solo pico activo, a los 3 min, fue eluído en una columna de silica normal con hexano al 100% en la fase móvil.